خط کنترل
مخلوط کردن حیوانی میزبان با پادتن ها از گونه های مختلف می تواند پادتن های ثانویه ای تولید کند. برای مثال، تزریق پادتن های موش به یک حیوان غیر از یک موش پادتن های ضد موش دوم را افزایش می دهد. بز، الاغ و خرگوش بیشترین گونه میزبانی برای تولید پادتن های ثانویه استفاده می کنند.
رایج ترین انواع آنتین های ثانوی آن هایی هستند که در برابر جمعیت ایمیونگلوبولین ها از یک گونه هدف تولید شده اند.
برای مثال، مصونيت يک بز با خالص موش IgG توليد ميکنه پادتن هاي ضد موش بز که به تمام کلاسها متصل ميشه زنجيرهاي سنگين و سبك و قطعات IgG موش همچنین مولکول های دیگر که دامنه های محافظت شده را به طور سختی به اشتراک گذاری می کنند (No. ...... "ايگ ام" همون زنجیرهای نوری که با "ایگ جی" داره
در مقابل، ایمنی کردن بز با تنها پادتن موش IgG1 پادتن های مشخصی به پادتن های IgG1 موشی دامنه هاي محافظت شده
به خاطر حفاظت بالا در ساختار بسیاری از دامنه های ایمنیوگلوبولین، پادتن های مخصوص ثانوی درجه باید تطهر . .
پادتن های موشی IgG1 می توانند تمام پادتن های بز که با استفاده از مثال بالا به موشی IgG1 متصل شوند، پاک سازی کنند. ...... عبور از یک ستون کروماتوگرافی که شامل موش IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG3, IgM و غیره این پادتن های ضد موش IgG1 را تصفیه می کند تا هر پادتن واکنش عبور کنه با غیر آیG1 هست دسته ها
بعلاوه، از میان ستون هایی که شامل پروتئین های سرم پاپولی شده از گونه های دیگر غیر از آنهایی که برای مصونی سازی میزبان استفاده می شود، می تواند پادتای ثانویه را پاک سازی بیشتر کند. این روش تقاطع (که معمولاً به عنوان صلیب اطلاعاتی نامیده می شود) یک پیشنهاد اضافی اضافی است. برای کاربردها هنگام استفاده از پادتن های اولیه از گونه های چندگانه و هنگامی که ایمینوگلوبیلین ها یا پروتئین های سرم می تواند در نمونه های بررسی باشد ......
محصولات خط کنترل
| آند باد | برنامه |
| خرگوش IgG | برای ایمنیاشناس: ELISA, LFA, CLIA |
| IgG موشی | |
| IgM موشی | |
| مرغ نگه دارد | |
| IgG ضد بز | |
| بز ضد خرگوش IgG | |
| آه | |
| موشی ضد IgG |
کنترل ایست تایپ
هدف اصلی کنترل ایزوتیپ این است که متصل شدن پادتن اصلی خاص است، به جای گیرنده های غیر مشخصی Fc یا تعامل با پروتئین های دیگر. همچنین می تواند پادتن ها را به طور رقابت متصل کند و همان عملکردی را با پادتن های مسدود کننده عملکرد انجام دهد.
کنترل ایزوتیپ باید کاملاً هماهنگ با منبع پادتن اصلی، Ig تایپ و برچسبی باشد.
یک سرم عادی می تواند به عنوان یک کنترل منفی در برچسب مصنوعی ایمنیofluorescence در صورتی که پادتن اصلی چند کلونی باشد استفاده شود. به خاطر منابع متفاوتي از mAbs از فلورست mAbs نشده به عنوان مثال: اگر پادتن اصلی موشی است که CD11b ضد موشی است و کلون OX-42 پاک شده IgG باشد، ایزوتیپ آن موشی IgG2a است، بنابراین موشی پاک شده IgG2a می تواند به عنوان کنترل ایزوتیپ یا OX-42 استفاده شود.
کنترل ایزوتیپ: اشاره به همان زیر طبقه ایمنیوگلوبولین با موآب در موش های بدون مواد، فاکتورهایی مانند سلول انتخاب پادتن بادی و انتخاب ناپذیر پادتن بیش از حد در نظر گرفته شد. اگر استفاده از لکه ایمنیفیلوورسنی مستقیم شود، کنترل ایزوتیپ باید با رنگ های فلورفرسنت برچسب باشد، مثل IgG1 FITC, IgG2a, PE و غیره. علاوه بر این، کنترل ایزوتیپ و تمرکز فلورروکروم با برچسب موآب و F: نسبت پی ( نسبت فلوروکروم به مولکول های ایمنیوگلوبولین) باید بهترین باشد، که حیاتی برای تنظیم دقیق علامت منفی و مثبت سلول های منفی ضروری است. از یک کنترل ایزوتیپ استفاده نکنید که با موآب مطابقت ندارد ترجیحاً محصولی که توسط یک آزمایشگاه آماده شده و استفاده از یک فرایند یا روش (مثل همان برند).
جریان سیومتری کنترل ایست تایپ
قطعه ي فاب پادتن ميتونه به سطح سلول با ارتباط پايين و غير مشخصي به سلول متصل بشه مخصوصا وقتی که سلول مرده باشه یا غشام سلول آسیب دیده می شود، این پیوند غیر خاصی واضح تر خواهد بود. بنابراین، کنترل های ایزوتیپ اغلب در آزمایش ها برای تعیین سطح فلورسین زمینه استفاده می شوند.
کنترل ایزوتیپ قبلاً یک مرجع منفی کلاسیک در سیتومتری جریان بود. برای رسیدن به همان رسیدگی بین کنترل ایزوتیپ و پادتن فلوروسسین، نسبت پروتئین، تمرکز و دیگر شاخص ها باید متناسب باشد.
احتیاط:
۱ ، اگر عبارت آنتیژن یک توزیع دومودی باشد و قله های منفی و مثبت از هم جدا می شوند، نتایج آزمایشی می تواند از طریق توزیع دومودی درک کند
...اگه سلول های فرهنگی پس تنظیم کنترل ایزوتیپ در حال حاضر میتونه فقط اطلاعاتی که منعکس به توانایی سلول های سلول رو بدست بیاره و دریافت اطلاعاتی که منعکس فلورسن غیر خاصی آن است سخت است. بنابراین، برقرار کردن یک کنترل ایزوتیپ برای شناسایی سلول های فرهنگ ایده آلی نیست.
در طی تحلیل های مختلفی از فلورسسین در یک آزمایش استفاده می شود، نشت فلورسنس تاثير قابل توجهي روي نتايج داره و فلورسن پشت زمينه ظاهري نيست در حال حاضر تنظیم کنترل ایزوتیپ مناسب نیست. انتخاب خوبيه (کنترل های FMO سلول های یک گونه است، با تمام فلورسین های دیگه ای که یک فلورسین برداشته مي تونه آشکار بشه و دروازه رو در جايي قرار بده پس کنترل لازم براي گيتينگه و کنترل ام کنترل FMO اکنون در آزمایش های چند رنگی مورد استفاده قرار می گیرد و برای آزمایش های چند رنگی ضروری است.)
4. هنگام استفاده از کنترل ایزوتیپ، دریافت می شود که سطح مقید غیر خاص بسیار بالا است، که ممکن است به خاطر متصل شدن انتهای غیر مشخصی Fc به سلول باشد که نتیجه یک سیگنال غیر مشخص، پس به مسدود کردن اف سي توجه کنيد
۵. ضروری است که بفهمیم که کنترل ایزوتیپ فقط یک مرجعه اما ما نمی توانیم نقطه های مثبت و منفی را تعیین کنیم یا یک دروازه بر اساس این قرار دهیم. ما بايد بدونيم که کنترل ايزوتيپ فقط ميتونه فلورسن پشت زمينه ي انتخاب غير خاصي و فلورسن پشت زمينه همچنين توسط عامل هاي ديگه اي مانند اتوفلورزونس، جبران بالا، پادتن ها، روش هاي برچسبي وسایل، دیگر رعایت ها یا تحلیل داده و دیگر فاکتور های فلورسین زمینه روی زمینه تاثیر می گذارند.
.6. لازمه که پادتن هدف رو ببندم و اين مناسب نيست که يه ايزوتيپ کنترل کنه به دلیل مقدار بیش از حد پادتن ها تغییر منفی و گسترش پایه رخ می دهد.
7. اگر سیگنال سلول و سایتوکین در آزمایش تشخیص داده شود، کنترل اف ام و کنترل بیولوژیکی منفی باید تنظیم شود، توجه خاص به سلول ها و سلول هایی که با بازدارنده های فسفورلیشن درمان شدند
۸ رنگ موثر سلول به طرح چند رنگی اضافه می شود تا سلول های مرده را حذف شود. چون لکه های غیر خاصی از سلول هایی که کشته شدن افراطی است، اگر حذف نشده، منجر به انتصاب غیر خاصی بیشتر میشه و روی آزمایش تاثیر می گذاره
در موقعیت های مختلفی برای تعیین کنترل های دیگری است. برای مثال، برای سلول های بی نظیر، تعیین کنترل های منفی برای زمینه و خودفولووریس، ولتاژ PMT را تعیین می کند.
برای سلول های کامل ، تعیین کردن برای سلول های یک پوشیده یا مایکروسفر، تنظیم جبرانی کنید؛ نمونه های تحریک نشده، کنترل منفی تجربه، سلول های مثبت ( انگیزه یا درمان شده با داروهای خاص)، کنترل عملی مثبت.
